Isolement et séparation des protéines sériques du lait de chamelle : mise en évidence du phénomène de désamidation de l'a-lactalbumine;conséquences sur la stabilité structurale
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Date
2015
Authors
Journal Title
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Publisher
Universite Mouloud Mammeri
Abstract
Les protéines sériques du lait camelin collecté dans la région de Ouargla ont été
fractionnées par chromatographie d’échange d’anions sur DEAE Cellulose et par perméation
sur Sephacryl S200 et caractérisées par leurs comportements électrophorétiques sur gel de
polyacrylamide dans diverses conditions. L’α-La cameline a été isolée par FPLC sur mono Q.
Cette protéine migre en une seule bande en SDS-PAGE et en deux bandes en Alkaline-PAGE.
La désamidation non enzymatique de l’α-la cameline été mise en évidence en suivant
par FPLC sur mono Q son comportement quand elle est incubée dans un tampon phosphate de
sodium, aux pH (7,4 et 8,4) pendant des temps variables (0-80 h) à 37°C. Contrairement à l’α-
La du lait bovin, celle provenant du lait de dromadaire, reste instable dans les conditions
physiologiques à 37°C, à pH neutre (7,4) ou à pH plus basique (8,4). Nous avons montré que
cette transformation chimique est séquencée avec apparition de deux nouvelles isoformes : A2
(qui apparait rapidement aux pH 7,4 et 8,4) et A3 (qui n’apparait que lentement à pH 8,4). Ce
résultat est confirmé par l’étude de la modélisation moléculaire de cette protéine.
Les trois isoformes de l’α-La cameline A1, A2 et A3, purifiées en deux étapes, par FPLC
puis par HPLC, ont été caractérisées par 2D-PAGE et leurs pHi apparents déterminés sont
estimés à 5,63 (A1), 5,36 (A2) et 5,05 (A3). A l’aide de la spectroscopie (FT-ICR), les masses
moléculaires suivantes ont été déterminées pour les trois isoformes : 14 421,8659 (A1), 14
422,8569 (A2) et 14 423,8479 Da (A3). L’analyse par spectrométrie de masse en tandem (FTICR-
MS/MS) a permis de montrer qu’il s’agit bien des résidus Asn16 et Asn45 qui étaient
sujets au phénomène de désamidation chimique.
La désamidation non enzymatique de l’α-La cameline rend la structure
tridimensionnelle beaucoup plus stable. Cette conclusion est rendue possible par les résultats
des approches spectrométrique, thermodynamique et protéolytique développées.
Description
119 f. ; 30 cm. (+ CD -Rom)
Keywords
Lait camelin, Lactalbumine, Electrophorèse, Désamidation
Citation
Biochimie Appliquée et Biotechnologies